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**方法在制药行业中的汇总

**方法在制药行业中的汇总

导读:**法系指用适当的物理或化学手段将物品中活的微生物杀灭或除去的方法。本法适用于无菌、**制剂、原料、辅料及医疗器械等生产过程中物品的**。

无菌物品是指物品中不含任何活的微生物。然而,对于任何一批**产品来说,优良无菌是既无法保证也无法被用试验来证实的,因为不可能对每一*小包装的产品进行无菌试验。事实上,物理或化学**方法手段**试验表明:微生物的杀灭曲线遵循对数规则,,因此,所以,批已**物品的无菌性标准一般在概率意义上定义为污染单位低到可接受的程度,一般用以物品**后微生物存活的概率-无菌保证值水平SAL(Sterility Assurance Level)表示。*终**产品产品微生物存活的概率的无菌保证值一般不得低于高于10-6,即**后微生物存活的概率不得大于百万分之一。无菌保证值与**物品中存在的微生物数量及特性密切相关,因此在产品生产的各个环节均应采取各种有效的手段(包括过滤**等措施)来降低待**产品的微生物污染并控制在规定的限度内。已**产品达到的无菌保证水平可通过验证确定。

**产品的无菌保证并不能依赖于*终产品的无菌检验,而是取决于生产过程中采用合格的**工艺、严格的GMP管理和良好的**质量保证体系。**工艺的制定确定应综合考虑其被**物品的性质、**方法的有效性、和经济性及、**后产品物品的完整性和稳定性等因素。
**程序的验证是无菌保证的重要内容必要条件。对**产品(包括*终容器及包装)而言,;**方法在实际应用前必须对其**程序经进行验证后,方可交付正式使用。验证内容包括:
⑴撰写确定验证方案及制定评估标准。
⑵确认**设备技术资料齐全、安装正确,并能处于正常运行(安装确认)。
⑶确认关键控制设备和仪表能在规定的参数范围内正常工作运行(运行确认)。
⑷采用**物品或模拟物品进行重复试验,提供各参数范围,确认**效果符合规定(性能确认)。
⑸汇总并完善各种文件和记录,撰写记录完整的验证报告。
日常生产中,应对**过程程序的运行情况进行监控,确认**过程中各关键参数(如温度、压力、时间、湿度、**气体浓度及吸收的辐照吸收剂量等)均在验证确定的范围内。;已采用的**程序中关键的设备和工艺应定期进行再验证。当**程序发生较大变化发生变更时,(包括**柜中**物品放置装载方式和数量发生的改变)时,应进行重新再验证。
产品在这种概率意义上的无菌保证并不能依赖于*终产品的无菌检验,而是取决于生产过程中采用合格的**工艺、严格的GMP管理和良好的**质量保证体系。这意味着批生产过程的监控将比批无菌试验结果更能反映产品的无菌保证水平。产品的无菌保证与**前产品被污染的程度及污染菌的特性相关。因此,应严格监控被**品**前的微生物污染水平及污染菌的耐受性,并在生产的各个环节采取各种措施降低污染,确保微生物污染控制在规定的限度内。

否则,应采取必要手段降低污染及消除抗性菌株,甚至进行**工艺的重新验证。**后,应防止已**物品被再次污染。任何情况下,都应要求容器及其密封系统确保产品在有效期内符合无菌要求。

**方法
常用的**方法有蒸汽湿热**法、干热**法、气体**法、辐射**法和过滤**法。可根据被**物品的特性采用一种或多种方法的组合**。只要产品允许,一般应尽可能选用终端*终**法(即产品分装至包装容器后再**)**。若产品不适**用终端*终**法,可选用过滤**法或无菌生产工艺达到无菌保证要求,只要可能,应对非*终**的产品作补充性**处理(如流通蒸汽**)。

一、蒸汽湿热**法

本法系指将物品置于**柜内利用高压饱和蒸汽或流通蒸汽**、过热水喷淋等手段使微生物菌体中的蛋白质、核酸发生变性而杀灭微生物的方法。流通蒸汽不能完全杀灭**孢子,一般可作为不耐热无菌产品的辅助**手段。高压蒸汽**该法**能力强,为热力学**中*有效、应用*广泛的****方法。药品、容器、培养基、无菌衣、胶塞以及其他其它遇高温和潮湿不发生变化或损坏的物品,均可用本法**。流通蒸汽不能完全杀灭**孢子,一般可作为不耐热无菌产品的辅助**手段。1.蒸汽**的有关参数

(1)D值
D值即微生物的耐热参数,系指一定温度下,杀灭90%微生物所需的时间,以分表示。D值越大,表明该微生物的耐热性越强。不同的微生物在不同环境条件下具有不同的D值。**方法验证时,微生物的耐热参数一般使用D121℃。

(2)Z值
Z值即**温度系数,系指使某一种微生物的D值下降一个对数单位,**温度应升高的值(℃),通常取10℃。它被用于定量的描述孢子对**温度变化的敏感程度,Z值越大孢子对温度的敏感性越弱。

(3)FT值

FT值系指给定的Z值下,**程序所赋予待**品在温度T下的**时间,以分表示。

LgP=lgN0-FT/DT式中P为**产品中微生物存活的概率。N0为产品**前微生物的数量。
**温度高时,FT值就小,**温度较低时,所需FT值就大。

(4)**率L
L值系指在某温度下**1分钟所相应的标准**时间(分),即F0和FT的比值(L=F0/FT=D121℃/DT)。不同Z值、不同温度下的L值是不同的,**率均可查得。

(5)F0值
F0值即标准**时间,系指**过程赋予待**物品在121℃下的等效**时间,即T=121℃、Z=10℃时的FT值。121℃为标准状态,F0值即为标准**时间,以分表示。一个**程序的总的标准**时间F0,应包括加热及冷却过程。它可以用**率对时间求积分的方法计算而得。
F0=∫t2t1L·dt式中dt为测定的间隔时间,相邻两次的间隔时间通常取1分钟。100℃以下,L值可以忽略。F0是作为**过程中监控物品达到无菌保证的重要手段。现代**器上设置有F0值自动显示系统。
上述参数及其关系为蒸汽**程序的设计、验证及日常**效果的监控提供了理论依据。
**条件及验证的基本要求
高压蒸汽湿热**条件一般通常采用121℃×20min或116℃×40min的程序,也可采用其它温度和时间参数。总之,必须保证物品**后的SAL≤10-6。总之,必须验证所采用的**条件能达到无菌保证要求。在实际应用中,对热稳定的产品或物品,可采用过度杀灭法菌,其SAL应≤10-1212。对热极为敏感的产品,可的允许标准**时间F0可低于8min。,但对F0低于8的**程序要求应在生产全过程中,对产品中污染的微生物严加监控,并采取各种措施防止耐热菌污染及降低微生物污染水平,以确保被****产品达到无菌保证要求。**物品的表面必须洁净,不得污染有机物质。必要时,外表应用适宜的包皮宽松的包裹,特别是烧瓶、试管等容器的塞子要防**落。**柜内的物品装载方式应保证**蒸汽彻底穿透物品,且不影响蒸汽穿透速度和**后的干燥程度。**柜中的空气应排空并被饱和蒸汽完全替代,以保证表压与**柜内压力的一致。
采用湿热**时[d1],被**物品应有适当的包装和装载方式,保证**的有效性和均一性。
蒸汽**法湿热**工艺验证时,应进行热分布试验、热穿透试验和生物指示剂验证试验。以确定**柜空载及不同装载时腔室里中的热分布状况及可能存在的冷点;在空载条件下,确认121℃时腔室的各点的温度差值应≤±1℃、;使用插入实际物品或模拟物品内的温度探头,确认**柜在不同装载时,*冷点物品的标准**时间(F0)达到设定的标准;用生物指示剂进一步确认在不同装载时冷点处的**物品达到无菌保证水平。本法常用的生物指示剂为嗜热脂肪芽孢杆菌孢子(Sporesof Bacillusstearothermophilus)。

二、干热**法
本法系指物品于干热**柜、隧道**器等设备中、利用干热空气达到杀灭微生物或消除热原物质的方法,在干热**柜、连续性干热**系统或烘箱等设备中进行**。可用适用于耐高温但不宜用蒸汽湿热**法**的物品的**,也是*为有效的除热原方法之一,如玻璃器具、金属制容器、纤维制品、固体试药、液状石蜡等均可采用本法**。
干热**条件一般为160~170℃×120min以上、170~180℃×60min以上或250℃×45min以上,也可采用其它温度和时间参数。总之,应保证**后的产品其SAL≤10-6。干热过度**杀灭后产品的SAL应≤10-12,此时物品一般无需进行**前污染微生物的测定。干热**250℃45min的干热**也可除去无菌产品包装容器及有关生产灌装用具中的热原物质。采用干热**时,被**物品应有适当的包装和装载方式,保证**的有效性和均一性。
用本法**的物品表面必须洁净,不得污染有机物质,必要时外面应用适宜的包皮宽松包裹。配有塞子的烧瓶、试管等容器口应有金属箔或纱布等包皮包裹,并用适宜的方式捆扎,防**落。干热**箱内物品排列不可过密,保证热能均匀穿透全部物品。
干热**法验证与蒸汽湿热**法相同,应进行热分布试验、热穿透试验、生物指示剂验证试验或**内**灭活验证试验。以确认**柜中的温度分布应符合设定的标准、确定*冷点位置、确认*冷点标准**时间(FH)能保证达到设定标准并达到SAL要求。常用的生物指示剂为枯草芽孢杆菌孢子(SporesofBacillussubtilis)。**内**灭活验证试验是证明除热原过程有效性的试验。一般将不小于1000单位的**内**加入待去热原的物品中,证明该去热原工艺能使内**至少下降3个对数单位。**内**灭活验证试验所用的**内**一般为大肠杆菌内**(Escherichiacoliendoxin)。验证时,一般采用*大装载方式。

三、辐射**法
本法系指将**产品置于适宜放射源辐射的γ射线或适宜的电子加速器发生的电子束中进行电离辐射而达到杀灭微生物的方法。本法*常用的为60Co-γ射线辐射**。医疗器械、容器、生产辅助用品、不受辐射破坏的原料药及成品等均可用本法**。采用辐射**法**的无菌产品其SAL应≤10-6。γ射线辐射**所控的参数主要是辐射剂量(指**物品的吸收剂量)。该剂量的制定应根据考虑产品**物品的适应性和及产品可能污染的微生物*大数量及*强抗辐射力,所使用的剂量事先应验证其有效性及安全性。常用的辐射**吸收剂量为25kGy。对*终产品、原料药、某些医疗器材应尽可能采用低辐射剂量**。**前,应对待被**物品微生物污染的数量和抗辐射强度进行测定,以评价**过程赋予该**物品的无菌保证水平。
**时,应采用适当的化学或物理方法对**物品吸收的辐射剂量进行监控,以充分证实**物品吸收的剂量是在规定的限度内。如采用与**物品一起被辐射的放射性剂量计,剂量计要置于规定的部位。在初安装时计量剂量计应用标准源进行校正,并定期进行再校正。当60Co-γ辐射用于中药非**制剂**以控制其微生物污染水平时,一般*高辐射吸收剂量为:散剂及含原粉胶囊剂3kGy、丸剂5kGy、半成品粉末6kGy。辐射**后的物品,应进行微生物检测,同时应测定中药**辐射前后的主要药效成分是否变化,以确定该方法的安全性和有效性。60Co-γ射线辐射**法验证时,除进行生物指示剂验证试验外,还应确认空载和装载时**腔内的辐射剂量的分布图、**物品的吸收剂量及*大和*小吸收剂量的分布、**物品的均一性、**腔内物品的装载方式等。常用的生物指示剂为短小芽孢杆菌孢子(Spores of Bacilluspumilus)。

四、气体**法
本法系指用化学**剂形成的气体杀灭微生物的方法。在充有**气体的高压腔室内进行。常用的化学**剂有环氧乙烷、气态过氧化氢、甲醛、臭氧(O3)等,本法适用于在气体中稳定的物品**。采用气体**法时,应注意**气体的可燃可爆性、致畸性和残留毒性。本法中*常用的气体是环氧乙烷,一般与80%~90%的惰性气体混合使用。该法可用于医疗器械,塑料制品等不能采用高温**的物品**。含氯的物品及能吸附环氧乙烷的物品则不宜使用。另外,使用气态过氧化氢和臭氧(O3)**,因其无危害性残留物,不会对操作人员和环境造成危害,适合于空间和物品表面的**。采用环氧乙烷**时,**柜内的温度、湿度、**气体浓度、**时间是影响**效果的重要因数。可采用下列**条件:
温度(54±10)℃
相对湿度(60±10)%
**压力8×105Pa
**时间90min
**条件应予验证。**时,先将**腔室先抽成真空,然后通入蒸汽使腔室内达到设定的温湿度平衡的额定值,再通入经过滤和预热的环氧乙烷气体。**过程中,应严密监控腔室的温度、湿度、压力、环氧乙烷浓度及**时间。必要时使用生物指示剂监控**效果。本法**程序的控制具有一定难度,整个**过程应在技术熟练人员的监督下进行。**后,应采取新鲜空气置换,使残留环氧乙烷和其他易挥发性残渣消散。并对后通入环氧乙烷残留物和反应产物进行监控,以证明其不超过规定浓度,避免产生毒性。
环氧乙烷**法验证时,应进行如下试验:泄露泄漏试验,以确认**腔室的密闭性;生物指示剂的验证试验,指示剂一般采用枯草芽孢杆菌孢子(SporesofBacillussubtilis);**后换气次数的验证试验,确认环氧乙烷及相应的反应产物含量在限定的范围内。验证设计时,还应考虑物品包装材料和**腔室中物品的排列方式对**气体的扩散和渗透的影响。

五、过滤**法
本法系利用**不能通过致密具孔滤材的原理以除去空气气体或液体中的微生物的方法。在开放式或封闭式过滤系统中进行。本法广泛用于制药
行业,特别是常用于对热不稳定的药品溶液或原料的**。
**过滤器采用孔径分布均匀的微孔滤膜作过滤材料,微孔滤膜分亲水性和疏水性两种。滤膜材质依过滤物品的性质及过滤目的而定。药品生产中采用的**滤膜孔径一般不超过0.22μm。过滤器不得对被滤过成分有吸附作用,也不能释放物质,不得有纤维脱落,禁用含石棉的过滤器。滤器和滤膜在使用前应进行洁净处理,并用高压蒸汽进行**或作在线**。更换品种和批次应先清洗滤器,再更换滤膜。过滤过程中无菌保证与过滤液体液体的初始生物负载负荷及过滤器的对数下降值LRV(LogReductionValue)有关。LRV是表示系指在规定条件下,待被过滤液体过滤前的微生物数量与过滤后的微生物数量比的常用对数值。
即:LRV=lgN0-LgN式中N0为产品**前的微生物数量。
N为产品**后的微生物数量。
LRV用于表示过滤器的过滤**效率,对孔径为0.22μm的过滤器而言,要求每1cm2有效过滤面积的LRV应不小于7。因此过滤**时,应将待被过滤产品总的污染量应控制在规定的范围限度内。为保证过滤**效果,可使用两个过滤器串连过滤,或在灌装前用过滤器进行再次过滤。在过滤**中,一般无法对全过程中过滤器的关键参数(滤膜孔径的大小及分布,滤膜的完整性及LRV)进行监控。因此,在每一次过滤**前后均应作滤器的完整性试验,即气泡点试验或压力维持试验或气体扩散流量试验。测定滤器是否符合已验证过的完整性控制标准,确认滤膜在**过滤过程中的有效性和完整性。完整性试验可使用完整性试验仪测定。**过滤器的使用时间不应超过一个工作日,否则应进行验证。过滤系统的验证包括过滤系统对过滤液体的适应性、过滤材料对溶液的污染程度、过滤器的规格、过滤器的**方法、过滤系统的完整性试验、生物指示剂试验、过滤液体的微生物含量控制及过滤时间、过滤器的使用寿命等。上述试验大部分可由滤器的生产厂商来进行。微生物挑战性试验常用的生物指示剂为缺陷假单胞菌(Pseudomonasdiminuta)。
通过过滤**法达到无菌的产品应严密监控其生产环境的洁净度,建议在无菌环境下进行过滤操作。相关的设备、包装容器、塞子及其它物品应采用适当的方法进行**,并防止再污染。

六、无菌生产工艺
无菌生产工艺系指必须在无菌控制条件下生产无菌制剂(如粉针剂)的方法,无菌分装及无菌冻干是*常见的无菌生产工艺。后者在工艺过程中须采用过滤**法。无菌生产工艺应严密监控其生产环境的洁净度,并应在无菌控制的环境下进行过滤操作。相关的设备、包装容器、塞子及其它物品应采用适当的方法进行**,并防止被再次污染。无菌生产工艺过程的无菌保证应通过培养基无菌灌装摸拟试验验证,试验结果的阳性率不得超过0.1%(置信度取95%)。值不得低于3。因此在生产过程中,应严密监控生产环境的无菌空气质量、操作人员的素质、各物品的无菌性。无菌生产工艺应定期进行验证,包括对环境空气过滤系统有效性验证及培养基模拟分灌装试验。
生物指示剂
生物指示剂系一类特殊的活微生物制成的特殊制剂品。可用于确定确认**设备的性能、**物品的**程序的建立和有效性的验证、**程序的再验证、供评估产品**是否达到无菌保证要求的依据、无菌空气过滤系统的评估生产过程**效果的监控等。用于**验证中的生物指示剂一般是**的孢子。

选择制备生物指示剂用微生物的基本要求不同的**方法使用不同的生物指示剂,制备生物指示剂所选用的微生物必须具备以下特性:
(1)菌种的耐受性应大于需**产品中所有可能被污染微生物的耐受性。
(2)菌种应无致病性。
(3)菌株应稳定。存活期长,易于保存。
(4)易于培养。若使用休眠孢子,生物指示剂中休眠孢子含量要在90%以上。
1.生物指示剂的制备
生物指示剂的制备应按一定的程序进行,制备前,应需先确定所用微生物的特性,如D值(微生物的耐热参数,系指一定温度下,将微生物杀灭90%所需的时间,以分表示)值等。菌株应用适宜的培养基(如产孢子的培养基)进行培养。培养物应制成悬浮液,其中孢子的数量应占优势,孢子应悬浮于无营养的液体中保存。生物指示剂中包含一定数量的一种或多种孢子,可制成多种形式,通常是将一定数量的孢子附着在无生命的载体上,如滤纸条、玻片、不锈钢、塑料制品等;孢子悬浮液也可密封于安瓿中;有的生物指示剂还配有培养基系统。生物指示剂应选用合适的材料包装进行包装以防止微生物的污染和孢子损耗,,并确定设定有效期。载体和内层包装材料在保护生物指示剂不被污染和损耗的同时,还应保证**剂穿透必须保证**因子易穿透包装内的微生物部位并能与生物指示剂充分接触、不得有任何污染物、在**过程中不被破坏,否则将影响生物指示剂有效性、稳定性及使用。同时载体和包装应设计应原则是便于贮存、运输、取样、转移接种,并能避免这些过程微生物的污染和孢子的损耗。

有些生物指示剂可直接将孢子接种至液体**物或具有与其相似的物理和化学特性的替代品中。此时必须论证替代品对孢子的生长繁殖没有影响
及孢子的耐受力没有降低。使用替代品时,应用数据证明二者的等效性。

2.生物指示剂的应用
在**程序的验证中,尽管可通过**过程某些参数的监控来评估**效果,但生物指示剂的被杀灭程度,则是评价一个**程序有效性更好的*直观的指标。**用的生物指示剂可来源于使用商品化市售的标准生物指示剂,或是也可使用由日常生产污染菌监控中分离的*耐受微生物制备的孢子并经实验室制备而得。在生物指示剂验证试验中,需确定孢子在实际**条件下的耐受性,并测定孢子的纯度和数量。验证时,生物指示剂的微生物用量应比日常检出的微生物污染量大,耐受性强,以保证**程序有更大的安全性。在终端*终**法中,生物指示剂应放在**柜中**因子*不易到达的部位(*冷点)的不同部位。若正常生产中需要用生物指示剂进行**效果监测时,应注意放置方式并避免指示剂直接接触到被**物品。生物指示剂按设定的条件**后取出,分别置培养基中培养,确定生物指示剂中的孢子是否被完全杀灭。过度**杀灭产品**验证一般不考虑微生物污染水平,可采用商品化市售的生物指示剂。对**手段耐受性差的产品,设计**程序时,根据经验预计在该生产工艺中产品微生物污染的水平,选择生物指示剂的菌种和孢子数量。这类产品的无菌保证应通过监控每批**前的微生物污染的数量和、耐受力性、和**程序验证所用的生物指示剂数量和耐受力及其他相关的参数获得的数据进行评估。

3.常用生物指示剂
(1)蒸汽湿热**法:蒸汽湿热**法*常用的生物指示剂为嗜热脂肪芽孢杆菌孢子(SporesofBacillusstearothermophilus,如NCTC10007NCIMB8157、ATCC7953)。D值为1.5~3.0min,每片(或每瓶)活孢子数5×105~5×106个,在121℃、19min下应被完全杀灭。另外此外,还可使用生孢梭菌孢子(SporesofClostridiumsporogenes如NCTC8594、NCIMB8053、ATCC7955),D值为0.4~0.8min。

(2)干热**法:干热**法*常用的生物指示剂为枯草芽孢杆菌孢子(SporesofBacillussubtilis,如NCIMB8058、ATCC9372)。D值大于1.5min,每片活孢子数5×105~5×106个。去热原验证时使用大肠杆菌内**(Escherichiacoliendoxin),加量不小于1000**内**单位。

(3)辐射**法:辐射**法*常用的生物指示剂为短小芽孢杆菌孢子(SporesofBacilluspumilus,如NCTC10327、NCIMB10692、ATCC27142)。每片活孢子数107~108,置于放射剂量25kGy条件下,D值约3kGy。但应注意**产品中所负载的微生物可能比短小芽孢杆菌孢子显示更大强的抗辐射力。因此短小芽孢杆菌孢子可用于监控**过程,但不能用于**辐射剂量的建立。

(4)气体**法:环氧乙烷***常用的生物指示剂为枯草芽孢杆菌孢子(SporesofBacillussubtilis,如NCTC10073、ATCC9372)。气态过氧化氢***常用的生物指示剂为嗜热脂肪芽孢杆菌孢子(SporesofBacillusstearothermophilus,如NCTC10007、NCIMB8157、ATCC7953)。每片活孢子数1×106~5×106个。环氧乙烷**中,枯草芽孢杆菌孢子D值大于2.5min,在环氧乙烷浓度为600mg/L,相对湿度为60%,温度为54℃下**,60min应被灭。

⑸过滤**法:过滤**法*常用的生物指示剂为缺陷假单胞菌(Pseudomonasdiminuta,如ATCC19146),用于滤膜孔径为0.22μm的滤器;黏质沙雷菌(Serratinmarcescens)(ATCC14756),用于滤膜孔径为0.45μm的滤器。

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