分析方法驗證的經驗

常規檢測中需驗證的分析項目主要有：鑒彆試驗，雜質定量檢查或限度檢查，有效成分含量測定，以及其他成分（如防腐劑等）的測定等。藥典規定驗證的內容有：專屬性、檢測限、定量限、準確度、精密度（包括重複性、中間精密度和重現性）、線性和範圍、耐用性。在實驗中視具體方法擬訂驗證的內容。附表中列出的分析項目和相應的驗證內容可供參考。方法驗證內容如下。
一、準確度
準確度係指用該方法測定的結果與真實值或參考值接近的程度，一般用回收率（%）表示。準確度應在規定的範圍內測試。案例：有關物質回收率

二、精密度
對於含量測定和雜質的定量測定一般應考慮方法的精密度。
三、專屬性
       專屬性係指在其他成分（如雜質、降解產物、輔料等）可能存在下，采用的方法能正確測定出被測物的特性。鑒彆反應、雜質檢查、含量測定方法均應考察其專屬性。如方法不夠專屬，應采用多個方法予以補充。
1．鑒彆反應
應能與可能共存的物質或結構相似化合物區分。不含被測成分的樣品，以及結構相似或組分中的有關化合物，應均呈負反應（不呈正反應）。
2．含量測定和雜質測定
    色譜法和其他分離方法，應附代表性圖譜，以說明方法的專屬性，並應標明諸成分在圖中的位置。色譜法中的分離度應符合要求。
    在雜質可獲得的情況下，對於含量測定，試樣中可加入雜質，考察測定結果是否受乾擾，並可與未加雜質的試樣比較測定結果。對於雜質測定也可向試樣中加入一定量的雜質，考察雜質能否得到分離。
    在雜質或降解產物不能獲得的情況下，可將含有雜質或降解產物的試樣進行測定，與另一個經驗證了的或藥典方法比較結果。用強光照射，高溫，高濕，酸、堿水解或氧化的方法進行加速破壞，以研究可能的降解產物和降解途徑。含量測定方法應比對二個方法的結果，雜質檢查應比對檢出的雜質個數，必要時可采用二管陣列檢測和質譜檢測，進行峰純度檢查。
四、檢測限
    檢測限係指樣品中被測物能被檢測出的低量。藥品的鑒彆試驗和雜質檢查方法，均應通過測試確定方法的檢測限。常用的方法如下。
1．非儀器分析目視法
用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地檢測出的低濃度或量。
2．信噪比法
用於能顯示基線噪聲的分析方法，即把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，算出能被可靠地檢測出的低濃度或量。一般以信噪比為3∶1或2∶1時相應濃度或注入儀器的量確定檢測限。
3．數據要求
應附測試圖譜，說明測試過程和檢測限結果。
五、定量限
    定量限係指樣品中被測物能被定量測定的低量，其測定結果應具有一定的準確度和精密度。雜質和降解產物用定量測定方法研究時，應確定方法的定量限。
常用信噪比法確定定量限。一般以信噪比為10∶1時相應濃度或注入儀器的量確定定量限。例：定量限檢測結果
六、線性與範圍
應在規定的範圍內測定線性關係。可用一貯備液經精密稀釋，或分彆精密稱樣，製備一係列供試樣品的方法進行測定，少製備5份供試樣品。以測得的響應信號作為被測物濃度的函數作圖，觀察是否呈線性，再用小二乘法進行線性回歸。必要時，響應信號可經數學轉換，再進行線性回歸計算。
七、耐用性
       耐用性係指在測定條件有小的變動時，測定結果不受影響的承受程度，為把方法用於常規檢驗提供依據。開始研究分析方法時就應考慮其耐用性。如果測試條件要求苛刻，則應在方法中寫明。典型的變動因素有：被測溶液的穩定性，樣品的提取次數、時間等。液相色譜法中典型的變動因素有：流動相的組成和pH值，不同廠牌或不同批號的同類型色譜柱，柱溫，流速等。氣相色譜法變動因素有：不同廠牌或批號的色譜柱、固定相，不同類型的擔體，柱溫，進樣口和檢測器溫度等。
案例：有關物質檢查HPLC方法的耐用性